PPA制備與使用的基本技術(shù)
點(diǎn)擊次數(shù)：2071 更新時(shí)間：2014-12-29
PPA制備與使用的基本技術(shù)
- 將初步純化的SPA與HRP用過碘酸鈉氧化法（交聯(lián)反應(yīng)時(shí)間在22℃下5h）交聯(lián)。
- 將上述PPA溶液過Sephadex G-100柱，條件同前。所收集的第1管至第22管的合并液，是PPA存在的主要組分，可用ELISA塑料平板法檢測(cè)活性。將合并液濃縮，然后加入30%左右甘油，貯于4℃冰箱備用
PPA的使用
- PPA-ELISA法。基本上與ELISA法相同，PPA代替了酶標(biāo)抗抗體。在進(jìn)行微量反應(yīng)板測(cè)定時(shí)，PPA常常加入0.1ml,稀釋度一般在1：2至1：100（應(yīng)按不同情況試驗(yàn)）。PPA與IgG是化學(xué)共價(jià)結(jié)合，反應(yīng)時(shí)間不宜過長(zhǎng)，不應(yīng)超過2h，控制在30min-60min,反應(yīng)時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)使PPA吸附到塑料載體上去。
- 用PPA進(jìn)行組織內(nèi)有關(guān)抗原的定位。甲醛對(duì)PPA有顯色影響，因此組織不可用甲醛固定，可用甲醛、乙醇等。PPA對(duì)組織內(nèi)抗原（先與IgG結(jié)合）的定位，反應(yīng)時(shí)間可以延長(zhǎng)，便于滲透入組織細(xì)胞內(nèi)，且沒發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重的物理吸附現(xiàn)象。
- 在PPA實(shí)驗(yàn)中稀釋液常用含0.5%（v/v）Tween20的0.02mol/L Ph 7.4 Tris-HC1緩沖液（2.42gTris溶于蒸餾水后用0.1N HC1調(diào)pH至7.4，然后加蒸餾水定容至1000ml,zui后加0.5ml Tween 20）。
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