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BCA法蛋白含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定，確保蛋白濃度在20-2000μg/ml內(nèi)。
貨號(hào)：YX-W-C202
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑A：液體×1瓶，4℃保存。
試劑B：液體×1支，4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支，4℃保存。
產(chǎn)品說(shuō)明：
樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。 測(cè)定原理： 堿性條件下，蛋白質(zhì)中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽鍵，能將Cu2+還原成Cu+；2分子的BCA與Cu+結(jié)合，生成紫色絡(luò)合物，在540-595nm有吸收峰，562nm處吸收峰ZUI強(qiáng)。 自備儀器和用品：
臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸餾水。
工作液配制：臨用前請(qǐng)根據(jù)擬用工作液體積（樣本數(shù)×0.2mL），將試劑A和B按照50：1的比例混合，蓋緊后充分混勻。
操作步驟：
一、樣品中可溶性蛋白質(zhì)提?。?/span>
1. 液體樣品：澄清液體樣品可以直接測(cè)定。
2. 組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液（自備，根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水），冰浴勻漿，10000rpm，4℃離心10min，取上清，即待測(cè)液。（動(dòng)物樣品常常需要稀釋）
3. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000rpm，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
二、測(cè)定操作：
1. 可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到562 nm，蒸餾水調(diào)零。
| 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測(cè)定管 |
蒸餾水（μL） | 4 |
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|
標(biāo)準(zhǔn)品（μL） |
| 4 |
|
待測(cè)液（μL） |
|
| 4 |
工作液（μL） | 200 | 200 | 200 |
混勻后置于60℃保溫30min，于微量玻璃比色皿/96孔板，于562nm處測(cè)定吸光值A(chǔ)，分別記為A空白管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A測(cè)定管。 | |||
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要做一次。
三、計(jì)算公式：
Cpr (mg/mL)= C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測(cè)定管－A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）
=0.5×（A測(cè)定管－A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）
注意事項(xiàng)：
本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途！
